苦荞麦总黄酮对软脂酸损伤脐静脉内皮细胞的保护作用

目的研究苦荞麦总黄酮对软脂酸损伤脐静脉内皮细胞的保护作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞EA.hy926,将细胞培养液分为正常对照组、模型组、苦荞麦总黄酮低浓度组、苦荞麦总黄酮中浓度组、苦荞麦总黄酮高浓度组和二甲双胍组。用软脂酸建立胰岛素抵抗状态下的血管内皮细胞模型,MTT法检测细胞增殖率,LDH试剂盒检测细胞LDH的漏出量,流式细胞技术检测细胞的凋亡率。结果与正常组比较,模型组细胞增殖率明显降低(P<0.01),LDH漏出量显著增高(P<0.01),凋亡率明显增高(P<0.01)。同模型组相比,苦荞麦总黄酮低、中、高浓度组,以及二甲双胍组细胞增殖率明显增高(P<0.01),凋亡率显著降低(P<0.01),且苦荞麦总黄酮各浓度组表现出明显的剂量依赖关系;苦荞麦中、高浓度组,以及二甲双胍组LDH漏出量明显减少(P<0.01)。结论苦荞麦总黄酮对软脂酸损伤的脐静脉内皮细胞具有明显的保护作用。     

毛蕊异黄酮抑制肺腺癌细胞增殖和迁移的miR-21/PTEN信号通路机制研究

目的:探讨毛蕊异黄酮(CA)通过调控微RNA-21(miR-21)/人类第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)信号通路对肺腺癌细胞增殖和迁移的抑制作用机制。方法:以人肺腺癌SPC-A1细胞为对象,采用MTT法检测不同剂量CA(5、15、25、50、75、100μg/mL)作用12、24、48、72 h后的细胞增殖情况,并计算细胞存活率、30%细胞生长抑制浓度(IC_(30))和半数抑制浓度(IC_(50));采用Transwell迁移试验检测低、中、高剂量CA(50、75、100μg/m L)作用24 h后的细胞迁移情况,记录染色细胞数并计算细胞迁移抑制率;采用蛋白质印迹法和实时聚合酶链反应法检测低、中、高剂量CA(50、75、100μg/mL)作用24 h后细胞miR-21以及PTEN、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白及其mRNA的表达情况;检测细胞在分别转染miR-21模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)后,CA(75μg/mL)对其miR-21及PETN、VEGF、MMP-9蛋白表达的影响。结果:经50、75、100μg/mL CA作用12、24、48 h,25、50、75、100μg/m L CA作用72 h后,细胞存活率均显著降低(P<0.05或P<0.01);12～72 h各时间点CA的IC_(30)值分别为82.24、50.45、46.34、31.81μg/mL,IC_(50)值分别为108.06、73.35、70.08、49.89μg/mL。与正常对照组比较,CA各剂量组染色细胞数,低剂量组细胞中VEGF蛋白以及中、高剂量组细胞中miR-21,VEGF、MMP-9蛋白及其mRNA的相对表达量均显著减少或降低,且中、高剂量组显著少于或低于低剂量组,高剂量组显著少于或低于中剂量组(P<0.05或P<0.01);CA各剂量组细胞迁移率以及中、高剂量组细胞中PTEN蛋白及其mRNA的相对表达量均显著升高,且中、高剂量组显著高于低剂量组,高剂量组显著高于中剂量组(P<0.05或P<0.01)。转染miR-21 mimic后,miR-21 mimic组细胞miR-21及VEGF、MMP-9蛋白的相对表达量均较正常对照组显著升高,PTEN蛋白的相对表达量显著降低(P<0.01);加入CA干预后,细胞中miR-21及VEGF、MMP-9蛋白的相对表达量均较miR-21 mimic组显著降低,PTEN蛋白的相对表达量均显著升高(P<0.05或P<0.01)。转染miR-21 inhibitor后,miR-21 inhibitor组细胞中miR-21及VEGF、MMP-9蛋白的相对表达量均较正常对照组显著降低,PTEN蛋白的相对表达量显著升高(P<0.05或P<0.01);加入CA干预后,细胞中miR-21及上述蛋白的表达较miR-21 inhibitor组均未见明显变化(P>0.05)。结论:CA可剂量依赖性地抑制肺腺癌SPC-A1细胞的增殖和迁移,且这种作用可能与调控miR-21/PTEN信号通路有关。     

脾气虚大鼠海马神经元线粒体自噬的初步研究

目的:通过观测大鼠海马神经元线粒体自噬现象和标志物表达,探讨脾气虚的发生机制。方法:16只雄性SD大鼠随机分为正常组和脾气虚模型组(模型组),每组8只;透射电镜观察海马神经元线粒体形态;提取海马神经元线粒体,JC-1法检测膜电位(△Ψm),ELISA法检测ATP水平,Western blot法检测不协调51样自噬激活激酶1(uncoordinated-51 like autophagy activating kinase 1,ULK1)、微管相关蛋白轻链3(light chain 3,LC3)-I和II及突触融合蛋白17(syntaxin17,STX17)表达。结果:与正常组比较,模型组线粒体数量减少,且自噬结构减少;模型组△Ψm和ATP水平明显下降,ULK1、LC3-I和STX17表达均显著减少,但LC3-II表达变化不明显。结论:海马线粒体自噬减退与脾气虚发生有关。     

补中益气汤含药血清诱导肺癌A549细胞凋亡及抗氧化能力的研究

目的研究补中益气汤含药血清诱导肺癌A549细胞凋亡及其抗氧化能力的分子机制。方法利用补中益气汤含药血清干预体外培养的肺癌A549细胞,分别应用MTT法检检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡发生,蛋白质免疫印迹实验检测Caspase 3活化,细胞活性氧实验检测细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生。结果补中益气汤含药血清能抑制A549细胞增殖,诱导Caspase 3依赖的细胞凋亡,且细胞凋亡发生与ROS活化相关。结论补中益气汤含药血清诱导A549细胞凋亡可能与ROS信号通路相关     

1,3,7,9-四甲基尿酸激活SirT3/AMPK/ACC信号通路减少高脂饮食小鼠肝脏脂肪化

目的研究嘌呤生物碱1,3,7,9-四甲基尿酸(theacrine)对高脂饮食小鼠肝脏甘油三酯蓄积的影响,并进一步探讨其作用机制。方法 C57BL/6J小鼠高脂喂养17周诱导单纯性脂肪肝模型,连续6周给予theacrine后,分别对肝组织切片进行HE和苏丹IV染色,测定肝脏中甘油三酯(TG)水平,用Western blot法检测肝脏中SirT3蛋白表达、AMPK及ACC蛋白的磷酸化水平。应用compound C抑制HepG2细胞中AMPK磷酸化,检测theacrine干预后相关蛋白的表达。结果 Theacrine能减少高脂饮食小鼠肝脏中TG水平,改善肝脏脂肪变性状态,增加肝脏中SirT3蛋白表达及AMPK和ACC蛋白的磷酸化水平。抑制细胞内AMPK的磷酸化后,theacrine仍能激活SirT3,但抑制了ACC的磷酸化作用。结论 Theacrine对SirT3的激活不依赖于AMPK的激活,而对ACC的磷酸化依赖于AMPK的激活。其改善高脂饮食小鼠肝脏脂肪化的作用可能与激活SirT3/AMPK/ACC信号通路相关。     

成人隐匿性自身免疫性糖尿病患者T淋巴细胞亚群分类变化的研究

目的:探讨成人隐匿性自身免疫性糖尿病患者外周血T细胞亚群分类变化.方法:用流式细胞仪分析42例初诊人隐匿性自身免疫性糖尿病患者和31例正常对照者的外周血T细胞亚群水平.结果:成人隐匿性自身免疫性糖尿病组CD4+淋巴细胞百分含量(53.12±3.50)%高于健康对照组(32.65±3.46)%,CD8+淋巴细胞百分含量(22.61±2.96)%低于健康对照组(29.54±3.11)%,CD4'/CD8'比值(2.54±0.26)高于健康对照组(1.37±0.21),且各组间差异均有统计学意义.结论:成人隐匿性自身免疫性糖尿病患者自身免疫调节功能异常,T淋巴细胞介导的免疫异常可造成对胰岛β细胞的损伤,在糖尿病发生中起一定作用.     

胃复康对人SGC-7901胃癌细胞株p53、bcl-2基因表达的影响

目的探讨中药胃复康对人SGC-7901胃癌细胞株p53、bcl-2基因表达的影响。方法PRMI1640血清培养的人SGC-7901胃癌细胞株分为胃复康实验组、生理盐水对照组和顺铂(DDP)化疗组。利用血清药理学方法制备药物血清,作用48h后,应用免疫细胞化学方法和图像分析方法观察胃复康、DDP对人SGC-7901胃癌细胞株p53、bcl-2基因表达影响。结果免疫细胞化学法显示抑癌基因p53和癌基因bcl-2主要定位在细胞质内。胃复康、DDP药物血清作用后,p53表达明显增强,bcl-2表达明显降低;随着作用时间延长,两种基因表达改变更明显。胃复康、DDP药物血清组p53和bcl-2表达的光密度值(AOD)与对照组差异显著(P<0.01)。结论中药胃复康药物血清上调p53和下调bcl-2的表达可能是其抑制胃癌细胞株SGC-7901的作用机制之一。     

母体慢性铝暴露对子代鼠海马LTP的损害作用

目的探讨母体于孕前、孕期和哺乳期不同浓度的铝暴露对子代大鼠海马CA3-CA1通路诱导的LTP的影响。方法从孕前30d始至子代断乳止,对照组饮用蒸馏水,低剂量(0.2%Al)和高剂量(0.4%Al)暴露组的母代大鼠分别和铝离子(Al3+)浓度为0.074mol·L-1(2g·L-1)、0.148mol·L-1(4g·L-1)的三氯化铝(AlCl3)蒸馏水溶液;采用石墨炉原子吸收法测定子代鼠的脑铝及血铝含量;采用细胞内记录方法测定子代鼠海马CA3-CA1通路诱导的LTP。结果两暴露组大鼠的血铝和脑铝平均含量明显高于对照组(P<0.05及P<0.01);高频刺激后,两暴露组群体锋电位(PS)幅值增强率(相对于基线值的百分数)逐渐减小,与对照组相比差异非常显著(P<0.01),但两铝暴露组之间差异不显著。结论母体不同浓度的慢性铝暴露可使PS幅值增强率减小,提示铝暴露损害了子代大鼠LTP的诱导与维持。     

调气消积汤影响Lewis肺癌细胞凋亡及p53、Bcl-2表达的实验研究

目的:探讨调气消积汤对Lewis肺癌细胞凋亡及p53、Bcl-2蛋白表达的影响。方法:C57BL/6小鼠常规接种Lewis肺癌,随机分为荷瘤对照组(MG)、调气消积汤组(TG)、顺铂组(DG)、综合组(ZG),每组10只。每天分别予饮用水、调气消积汤各0.4ml灌胃12天;隔日一次腹腔注射生理盐水、顺铂0.13ml共3天。应用电镜技术检测调气消积汤对Lewis肺癌细胞凋亡的影响,用Western Blot法检测p53、Bcl-2基因蛋白的表达。结果:电镜下可见细胞凋亡的特异性标志-凋亡小体形成。调气消积汤组、顺铂组及综合组均可降低p53、Bcl-2蛋白的表达,与荷瘤对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:调气消积汤能促进Lewis肺癌小鼠肿瘤细胞凋亡,与化疗药物合用能增强促肺癌细胞凋亡的能力;下调凋亡相关基因突变型p53、Bcl-2的表达水平,可能是调气消积汤发挥抑瘤作用的分子机制之一。     

眼针对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织细胞间黏附因子-1表达的影响

目的:观察眼针对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织细胞间黏附因子(ICAM-1)表达的影响,探讨眼针治疗脑缺血再灌注损伤的机制。方法:40只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和眼针组,每组10只。模型组和眼针组应用线栓法复制脑缺血再灌注损伤大鼠模型。眼针治疗取肝区、上焦区、下焦区、肾区进行,每日两次,每次20min。再灌注后72h进行神经功能缺损评分,采用Western blot、实时荧光定量聚合酶链反应法测定脑组织ICAM-1蛋白及mRNA表达的变化。结果:眼针组再灌注损伤72h后较模型组神经功能缺损评分有明显下降(P<0.01),眼针组大鼠脑组织ICAM-1蛋白及mRNA表达显著低于模型组(P<0.05)。结论:眼针具有明显的改善大鼠脑缺血再灌注损伤的作用,其机制可能与其下调脑组织ICAM-1表达有关。